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通用型細(xì)菌16S rDNA 熒光定量PCR擴(kuò)增檢測試劑是一種旨在運(yùn)用SYBR綠色熒光染料作為標(biāo)記信號(hào)，針對(duì)微生物樣本DNA進(jìn)行保守性序列PCR擴(kuò)增，實(shí)時(shí)檢測和定量分析擴(kuò)增產(chǎn)物的技術(shù)方法?？梢员挥糜诟鞣N樣品，包括血液、體液、組織、土壤等的細(xì)菌拷貝數(shù)的定量檢測。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，無核酶污染，操作便捷，敏感高效，定量準(zhǔn)確，重復(fù)性強(qiáng)。
技術(shù)背景
16SrRNA作為非培養(yǎng)依賴性標(biāo)記的分子指模（fingerprinting）技術(shù)，有別于傳統(tǒng)的選擇性培養(yǎng)技術(shù)，用于研究微生物的分類學(xué)（phylogenetics）。核糖體RNA（ribosome RNA）存在于所有微生物體內(nèi)，且結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)化保留；容易分離和識(shí)別；其一級(jí)和二級(jí)結(jié)構(gòu)具有高度進(jìn)化保守區(qū)域（conserved region）和物種特異性可變區(qū)域（variable region）；其基因序列變異非常緩慢，且不會(huì)發(fā)生平行基因轉(zhuǎn)移（horizontal gene transfer）。其包括5S、16S、23S。5S信息量不夠充分；23S不穩(wěn)定；而微生物16SrRNA基因較為穩(wěn)定，初級(jí)結(jié)構(gòu)含有1500個(gè)堿基。通過引物設(shè)計(jì)，擴(kuò)增產(chǎn)物。SYBR綠色熒光染料，作為DNA結(jié)合染料，可以和擴(kuò)增子（amplican）上雙鏈DNA的任一小溝（minor groove）結(jié)合，而發(fā)出熒光信號(hào)。根據(jù)每一循環(huán)的熒光強(qiáng)度來確定擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)量，并用循環(huán)閾值（threshold cycle；Ct）表示，計(jì)算獲得拷貝數(shù)。
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技術(shù)背景
16SrRNA作為非培養(yǎng)依賴性標(biāo)記的分子指模（fingerprinting）技術(shù)，有別于傳統(tǒng)的選擇性培養(yǎng)技術(shù)，用于研究微生物的分類學(xué)（phylogenetics）。核糖體RNA（ribosome RNA）存在于所有微生物體內(nèi)，且結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)化保留；容易分離和識(shí)別；其一級(jí)和二級(jí)結(jié)構(gòu)具有高度進(jìn)化保守區(qū)域（conserved region）和物種特異性可變區(qū)域（variable region）；其基因序列變異非常緩慢，且不會(huì)發(fā)生平行基因轉(zhuǎn)移（horizontal gene transfer）。其包括5S、16S、23S。5S信息量不夠充分；23S不穩(wěn)定；而微生物16SrRNA基因較為穩(wěn)定，初級(jí)結(jié)構(gòu)含有1500個(gè)堿基。通過引物設(shè)計(jì)，擴(kuò)增產(chǎn)物。SYBR綠色熒光染料，作為DNA結(jié)合染料，可以和擴(kuò)增子（amplican）上雙鏈DNA的任一小溝（minor groove）結(jié)合，而發(fā)出熒光信號(hào)。根據(jù)每一循環(huán)的熒光強(qiáng)度來確定擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)量，并用循環(huán)閾值（threshold cycle；Ct）表示，計(jì)算獲得拷貝數(shù)。
